Hap46: ein vielseitiges Protein

Hap46 ist ein multifunktionales Protein, welches über direkte Bindungspartner oder indirekt, über hsc70 als Brückenprotein, auf zelluläre Vorgänge wie Apoptose, Transkription, Signaltransduktion und Proliferation einwirken kann. Zudem fungiert es als Co-Chaperon von hsc70. Um die vielfältigen Funktionen von Hap46 innerhalb der Zelle besser verstehen und einordnen zu können, vor allem im Hinblick darauf, daß Hap46 bei vielen Tumorarten eine veränderte Expression aufweist, wurde in der vorliegenden Arbeit die Interaktion von Hap46 mit dem Chaperon hsc70, mit DNA und mit dem Transkriptionsfaktor c-Jun näher untersucht. Auf einer hervorstehenden Protuberanz der ATPase-Domäne von hsc70 konnten für die Bindung an Hap46 wichtige Aminosäuren identifiziert werden: Glutamin22 und Lysin25. Interaktionsregionen von hsc70 auf Hap46 wurden durch Analyse membrangebundener Peptide identifiziert. Der quantitative Beitrag dieser Interaktionsregionen wurde mittels Elisa-Analysen mit gekoppeltem hsc70 und Deletionsmutanten von Hap46 überprüft. Es zeigte sich, daß außer dem C-Terminus von Hap46, welcher für die Bindung an hsc70 essentiell ist (BAG-Domäne), auch die N-terminalen ersten zehn Aminosäuren einen wesentlichen Beitrag für die Interaktion der beiden Proteine leisten. Diese N-terminalen Aminosäuren sind essentiell für die DNA-Bindung von Hap46. Mutationsanalysen des DNA-Bindungsmotivs mit anschließender Überprüfung des Bindungsverhaltens über Gel-Retardationsassays ergaben, daß die beiden mittleren Aminosäuren zweier basischer Tripletts, das Lysin3 und Arginin7, zusammen mit den jeweils benachbarten Aminosäuren eine wichtige Rolle spielen. Die Bindung von Hap46 an DNA zeigte zudem eine hohe Flexibilität, die dann zum Tragen kommt, wenn Hap46 außer mit DNA mit anderen Proteinen interagiert. So konnte ebenfalls in Gel-Retardationsassays nachgewiesen werden, daß an DNA gebundenes Hap46 immer noch mit c-Jun interagieren kann. Dies ist insofern von Bedeutung, da die DNA-Bindungsregio.